Hepatitis E virus in Cuba: A cross-sectional serological and virological study in pigs and people occupationally exposed to pigs.

Surveillance of hepatitis E virus (HEV) in risk groups is an important strategy to monitor its circulation pattern and to timely detect changes thereof. The aims of this cross-sectional study were to estimate the prevalence of HEV infections in pigs and humans from different regions of the country, to identify risk factors for increasing anti-HEV IgG prevalence and to characterize HEV strains. The presence of anti-HEV antibodies was assessed by commercial ELISA in serum samples from the general population, farm and slaughterhouse employees, as well as pigs sampled in the three regions of Cuba from February to September 2016. Overall, individuals with occupational exposure to swine or swine products (70/248, 28.2%) were 4 times more likely to be seropositive compared to the general population (25/285, 8.7%; OR: 4.18; p < .001). Within the risk group, risk factors included age, number of years working in a professional activity with direct exposure to swine, geographic region and distance between residence and closest professional swine setting, while wearing gloves had a protective effect. Prevalence of total anti-HEV antibodies in swine was 88.2% (165/187) and HEV RNA was detected by real-time RT-PCR in 9.2% (16/173) swine stools. All HEV strains sequenced clustered within genotype 3. Some strains clearly belonged to subtype 3a, while another group of strains was related with subtypes 3b and 3 k but partial HEV sequences did not allow unequivocal subtype assignment. These findings suggest that the high HEV exposure in Cuban individuals with swine-related occupations could be due to enzootic HEV in certain regions, direct contact with infectious animals or their products as well as environmental contamination.

Evaluación de estuches de PCR-tiempo real para detección de virus del papiloma humano de alto riesgo / Evaluation of real-time PCR kits to detect high-risk human papillomavirus

RESUMEN Introducción: El empleo de técnicas moleculares para el diagnóstico de virus del papiloma humano de alto riesgo oncogénico (VPH-AR) es crucial para la detección precoz del cáncer cervicouterino. Objetivo: Evaluar el desempeño analítico de dos estuches de PCR-tiempo real, comercializados por el Centro de Inmunoensayo de Cuba, para detectar VPH-AR. Métodos: Se utilizaron dos paneles de ADN de muestras cervicouterinas: uno con 150 muestras, para validar el estuche SUMASIGNAL HPV 16/18, el proceso de extracción de ADN y su utilidad como prueba cuantitativa, y otro con 163 muestras para evaluar el estuche HPV 13+2. Se determinó la utilidad clínica del estuche HPV 13+2 en 55 muestras cervicovaginales autocolectadas. Se calcularon los indicadores de desempeño analítico de ambos estuches con respecto a pruebas de referencia. Resultados: Los indicadores de desempeño para SUMASIGNAL HPV 16/18 fueron excelentes (> 95 %), concordancia 96 %, índice kappa=0,93 [0,85-1,01]. La extracción de ADN mostró 100 % de especificidad clínica y analítica y 95 % de sensibilidad analítica. Se obtuvo buena correlación con la prueba de referencia cuantitativa (r = + 0,688). El estuche HPV 13+2 tuvo especificidad y sensibilidad clínicas del 100 %, la especificidad analítica fue del 84 % debido a reactividad cruzada con otros VPH-AR. Su aplicación clínica reveló alta frecuencia de infección (41,8 %): 23,6 % con VPH-AR, particularmente en mujeres jóvenes (50 %). La muestra autocolectada resultó útil (100 %). Conclusión: Los ensayos evaluados mostraron altos estándares de calidad, lo que permitiría su uso con una cobertura nacional en una plataforma tecnológica disponible para todo el país.

ABSTRACT Introduction: The use of molecular techniques for the diagnosis of high oncogenic risk human papillomavirus (hrHPV) is crucial for the early detection of cervical cancer. Objective: To evaluate the analytical performance of two real-time PCR kits, commercialized by the Cuban Immunoassay Center, to detect hrHPV. Methods: Two DNA panels from cervical samples were used: one with 150 samples to validate the SUMASIGNAL HPV 16/18 kit, the DNA extraction process and its usefulness as a quantitative test; and another with 163 samples to evaluate the HPV 13+2 kit. The clinical utility of the HPV 13+2 kit was determined in 55 self-collected cervicovaginal samples. The analytical performance indicators of both kits were calculated with respect to reference tests. Results: Performance indicators for SUMASIGNAL HPV 16/18 were excellent (>95%), concordance 96%, kappa index=0.93 [0.85-1.01]. DNA extraction showed 100% clinical and analytical specificity and 95% analytical sensitivity. Good correlation was obtained with the quantitative reference test (r = + 0.688). The HPV 13+2 kit had 100% clinical specificity and sensitivity, analytical specificity was 84% due to cross-reactivity with other hrHPVs. Its clinical application revealed a high frequency of infection (41.8%): 23.6% with hrHPV, particularly in young women (50%). The self-collected sample was viable (100%). Conclusion: The assays evaluated showed high quality standards, which would allow their use with national coverage in a technological platform available for the whole country.

Evaluación de ensayos ultramicroanalíticos para la detección de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 / Evaluation of ultramicroanalytic assays to detect antibodies against SARS-CoV-2

Introducción: En el presente trabajo se muestran los resultados de la validación de los ensayos serológicos in vitro para la detección de anticuerpos IgM, IgG y anticuerpos totales contra el SARS-CoV-2 UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 y UMELISA SARS-CoV-2 IgG desarrollados por el Centro de Inmunoensayo (CIE). Métodos: Se utilizaron paneles de muestras de suero de individuos negativos y de casos confirmados de COVID-19 para determinar el desempeño analítico de cada ensayo. Resultados: La especificidad clínica de los ensayos UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 y UMELISA SARS-CoV-2 IgG fue del 100 por ciento en todos los ensayos y la especificidad analítica fue de 100 por ciento para los dos primeros ensayos y del 93,1 por cientopara el último. La sensibilidad clínica fue de 64,3, 80,8 y 97,5 por ciento, respectivamente. El valor predictivo positivo fue de 100 por ciento en todos los ensayos, en tanto que el negativo osciló entre 83,3 y 95,2 por ciento. La concordancia fluctuó entre 92,4 y 96,9 por ciento y el índice kappa de todos los ensayos fue muy bueno. La sensibilidad de los ensayos se incrementó a 82,76, 96,5 y 100 por ciento, respectivamente, en las muestras de suero colectadas con más de 14 días de iniciado el cuadro clínico. Conclusiones: Los ensayos demostraron una elevada sensibilidad y especificidad, lo que permite contar con herramientas basadas en una tecnología desarrollada en Cuba que posibilita la realización de estudios serológicos, vigilancia epidemiológica y de otro tipo, incluyendo los relacionados con vacunas en una plataforma con amplia distribución nacional(AU)

Introduction: This paper shows the results obtained in the validation of in vitro serological assays to detect IgM, IgG antibodies, and total antibodies against SARS-CoV-2 UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 and UMELISA SARS-CoV-2 IgG developed by the Immunoassay Center. Methods: Panels of serum samples from negative and COVID-19 confirmed patients were used to determine the analytical performance of each assay. Results: UMELISA SARS-CoV-2 IgM, UMELISA ANTI-SARS-CoV-2 and UMELISA SARS-CoV-2 IgG assays demonstrated 100 percent clinical specificity for all assays; and 100 percent analytical specificity for the first two assays, and 93.1 percent for the last one. Clinical sensitivity was 64.3 percent, 80.8 percent and 97.5 percent, respectively. The positive predictive value was 100 percent in all assays, while the negative predictive value ranged from 83.3 percent to 95.2 percent. Concordance varied from 92.4 percent to 96.9 percent, and kappa index in every assay was very good. Assays sensitivity increased to 82.7 percent, 96.5 percent and 100 percent, respectively for serum samples collected more than 14 days after onset of the symptoms. Conclusions: The assays demonstrated high sensitivity and specificity, which allows us to have Cuban technology-based tools for serological, epidemiological surveillance, and other types of studies, including those related to vaccines on a platform with wide national distribution(AU)

Evaluation of seven SARS-CoV-2 rapid IgM/IgG tests

RESUMEN Introducción: A finales de 2019, se detectó un nuevo coronavirus en China que provocó una enfermedad respiratoria aguda conocida como COVID-2019. Objetivo: Evaluar siete sistemas comerciales para la detección rápida de anticuerpos para determinar su sensibilidad, especificidad y robustez en nuestras condiciones para ser utilizados por el Sistema Nacional de Salud. Métodos: Se evaluaron siete sistemas para la detección de anticuerpos IgM/IgG. Se conformó un panel de evaluación con muestras de individuos negativos, sueros de otras afecciones previas a la pandemia y de pacientes positivos con la enfermedad. Resultados: Las cifras de sensibilidad general oscilan entre el 25 % y el 88 %, siendo los sistemas Realy Tech y Deep Blue los que mostraron los mejores resultados. La especificidad para ambos fue del 100 %. La tasa de IgM positiva según Realy Tech o Deep Blue aumentó a 94,1 % o 81,8 % en la etapa tardía de la enfermedad. Conclusiones: Los sistemas Realy Tech y Deep Blue detectaron IgM/IgG en suero y en sangre total con adecuada sensibilidad y especificidad. La reactividad cruzada no parece ser un problema. La serología en el caso de COVID-19 no puede utilizarse como diagnóstico pero permite a la vigilancia epidemiológica conocer el estado inmunológico de las poblaciones. Es fundamental analizar la respuesta inmune frente a la infección para realizar la caracterización epidemiológica y potencialmente informar el riesgo individual de futuras enfermedades y el estudio de posibles vacunas.

ABSTRACT Introduction: In late 2019, a new coronavirus was detected in China causing an acute respiratory illness known as COVID-2019. Objective: Evaluate seven commercial systems for the rapid detection of antibodies to determine their sensitivity, specificity and robustness in our conditions to be used by the National Health System. Methods: Seven systems were evaluated for the detection of IgM/IgG antibodies. Evaluation panel with samples from negative individuals, sera from other pathologies prior to the pandemic and from positive patients with the disease were conformed. Results: General sensitivity figures range between 25 and 88%, with the Realy Tech and Deep Blue systems showed the best results. The specificity for both was 100%. The IgM positive rate according to Realy Tech or Deep Blue increased to 94.1 or 81.8% in the late stage of the disease. Conclusions: Realy Tech and Deep Blue systems detected IgM/IgG in serum and in whole blood with adequate sensitivity and specificity. Cross-reactivity does not seem to be a problem. Serology in the case of COVID-19 cannot be used as a diagnostic but it allows epidemiological surveillance to know the immune status of populations. It's essential to analyze the immune response against the infection to carry out epidemiological characterization and potentially inform individual risk of future disease and the study of potential vaccines.

Evaluación del desempeño clínico del ensayo SUMASIGNAL VHC para la detección del ARN del virus de la hepatitis C

RESUMEN Introducción: La detección y cuantificación del genoma del virus de la hepatitis C (ARN-VHC), mediante la transcripción inversa-PCR en tiempo real (RT-qPCR), es vital para el diagnóstico y seguimiento del tratamiento antiviral de los pacientes con hepatitis C. Objetivo: Evaluar los indicadores de desempeño clínico como la especificidad, sensibilidad y reproducibilidad del ensayo SUMASIGNAL VHC, comercializado por el Centro de Inmunoensayo (Cuba), tomando como técnica de referencia la prueba Artus® HCV RG RT-qPCR. Métodos : Se empleó un panel conformado por 70 muestras de suero: 46 ARN-VHC positivas, 12 ARN-VHC negativas y 12 positivas a marcadores moleculares de otros virus. El coeficiente de correlación de Pearson (r) y la prueba de Bland-Altman, se utilizaron para comparar las cargas virales del VHC, obtenidas por las técnicas SUMASIGNAL VHC y la de referencia; las que fueron expresadas en logaritmo en base 10 (log10) UI/mL. Los valores de p< 0,05 se consideraron estadísticamente significativos. Resultados: La sensibilidad y especificidad clínica del SUMASIGNAL VHC fue 100 %; mientras que no se detectó reactividad cruzada con los otros virus evaluados. Se demostró que el ensayo en cuestión, tuvo una correlación buena (r= 0,89) y fuerte concordancia (media= -0,01 Log10 UI/mL) con la prueba de referencia (p< 0,0001). La reproducibilidad de la cuantificación del ARN-VHC en dos momentos diferentes, con la prueba SUMASIGNAL VHC mostró una correlación excelente (r= 0,97; p< 0,0001). Conclusiones: El ensayo SUMASIGNAL VHC proporciona datos válidos, reproducibles y técnicamente confiables para realizar el diagnóstico específico del VHC, incluso constituye una herramienta útil para monitorear la carga viral de este agente en el Sistema Nacional de Salud Cubano.

ABSTRACT Introduction: Detection and quantification of the hepatitis C virus genome (HCV RNA) by real time reverse transcription PCR (RT-qPCR) are vital for the diagnosis and antiviral treatment follow-up of hepatitis C patients. Objective: Evaluate the clinical performance of the SUMASIGNAL HCV assay for quantification of HCV viral load. Methods: A panel was formed with 70 serum samples: 46 HCV RNA positive, 12 HCV RNA negative and 12 positive for molecular markers of other viruses. Pearson's correlation coefficient (r) and the Bland-Altman plot were used to compare the HCV viral loads obtained by SUMASIGNAL HCV techniques with reference values, which were expressed as base 10 logarithm (log10) UI/ml. Values of p <0.05 were considered statistically significant. Results: The clinical sensitivity and specificity of SUMASIGNAL HVC were 100%, and no cross-reactivity was detected with the other viruses evaluated. The study assay exhibited a good correlation (r= 0.89) and strong concordance (mean= -0.01 Log10 UI/ml) with the reference test (p< 0.0001). Reproducibility of the HCV RNA quantification with the SUMASIGNAL HCV test at two different moments displayed an excellent correlation (r= 0.97; p< 0.0001). Conclusions: The SUMASIGNAL HVC assay provides valid, reproducible and technically reliable data for specific HCV diagnosis. It is also a useful tool to monitor the viral load of this agent in the Cuban National Health System.

Polimorfismos del gen de interleucina 10 y respuesta virológica sostenida en pacientes cubanos coinfectados con virus de hepatitis C y virus de inmunodeficiencia humana / Interleukin-10 gene polymorphisms and sustained virological response in Cuban patients coinfected with hepatitis C virus and human immunodeficiency virus

Introducción: En pacientes infectados con el virus de la hepatitis C se demostró que los polimorfismos de un simple nucleótido del gen de la interleucina 10 (IL10), influyen en la respuesta virológica sostenida al tratamiento con interferón y ribavirina, y en la inmunopatogénesis de la enfermedad. Objetivo: Determinar la frecuencia de los polimorfismos de un simple nucleótido de la región promotora del gen de la interleucina 10, según respuesta virológica sostenida y grado de lesión hepática. Métodos: Se realizó un estudio descriptivo, de corte transversal y se determinó la carga del virus de la hepatitis C por RT-PCR en tiempo real. Se estudiaron 25 pacientes cubanos con virus de inmunodeficiencia humana coinfectados con VHC, 24 semanas después del tratamiento con interferón y ribavirina. Para evaluar la variabilidad genética de la interleucina 10, los polimorfismos de un simple nucleótido se identificaron por secuenciación nucleotídica, -592 (A>C) y -819 (T>C). El grado de fibrosis hepática se calculó por el índice aspartato aminotransferasa/plaquetas. Resultados: El 44,0 por ciento (11/25) de los pacientes lograron respuesta virológica sostenida, y en el 56,0 por ciento (14/25) restante no se obtuvo esta. En los individuos en que se dio la respuesta predominaron los genotipos bajos productores de la interleucina 10, -592AA (36,3 por ciento vs. 21,4 por ciento) y -819TT (54,5 por ciento vs. 21,4 por ciento). En estos casos, el análisis de la frecuencia alélica mostró mayor frecuencia del alelo T para el SNP -819 (p= 0,0470). El índice aspartato aminotransferasa/plaquetas fue compatible con fibrosis hepática sin cirrosis en pacientes sin respuesta virológica sostenida, mientras que en los coinfectados que tuvieron respuesta indicó ausencia de lesión hepática. Conclusiones: Los resultados sugieren que las variantes de los polimorfismos de un simple nucleótido del gen de la interleucina 10 evaluados, podrían estar relacionados con la respuesta virológica sostenida y la patogénesis de la hepatitis C en los pacientes estudiados(AU)

Introduction: The study of patients infected with hepatitis C virus revealed that polymorphisms of a single nucleotide of the interleukin-10 (IL10) gene influence the sustained virological response to the treatment with interferon and ribavirin, and the immunopathogenesis of the disease. Objective: Determine the frequency of single-nucleotide polymorphisms from the interleukin-10 gene promoter region according to the sustained virological response and the degree of liver injury. Methods: A descriptive cross-sectional study was conducted and hepatitis C viral load was determined by RT-PCR. A sample of 25 Cuban HIV/HCV coinfected patients were studied 24 weeks after treatment with interferon and ribavirin. To evaluate the genetic variability of interleukin 10, the single-nucleotide polymorphisms were identified by nucleotide sequencing, -592 (A>C) and -819 (T>C). The degree of liver fibrosis was estimated by the aspartate aminotransferase / platelet index. Results: Of the patients studied, 44.0 percent (11/25) achieved a sustained virological response and 56.0 percent (14/25) did not. In individuals displaying the response, a predominance was found of low interleukin-10 producing genotypes, -592AA (36.3 percent vs. 21.4 percent) and -819TT (54.5 percent vs. 21.4 percent). In those cases, allele frequency analysis showed a greater allele T frequency for SNP -819 (p= 0.0470). The aspartate aminotransferase / platelet index was compatible with kidney fibrosis without cirrhosis in patients without a sustained virological response, and indicated an absence of liver injury in coinfected patients displaying a response. Conclusions: Results suggest that the variants evaluated of single-nucleotide polymorphisms of the interleukin-10 gene could be related to the sustained virological response and the pathogenesis of hepatitis C in the patients studied(AU)

Evaluación de una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real simple y rápida para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B / Evaluation of a simple and fast real time polymerase chain reaction assay for quantification of hepatitis B virus DNA

Introducción: Los ensayos para cuantificar el ADN del virus de la hepatitis B (VHB) o carga viral son imprescindibles en el diagnóstico y en el seguimiento de los pacientes con hepatitis B crónica; de ahí que estén disponibles estuches diagnósticos para esta función. En el presente estudio se muestra la validación de SUMASIGNAL VHB (un paso), el cual es un sistema de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RCP-TR) para la cuantificación del genoma del VHB, propuesto por el Centro de Inmunoensayo. Objetivo: Evaluar el desempeño analítico de SUMASIGNAL VHB (un paso). Métodos: Se utilizó un panel de 80 muestras de suero bien caracterizadas y el Tercer Estándar Internacional de la OMS para las técnicas de amplificación de ácidos nucleicos del virus de la hepatitis B. Se determinaron las características del ensayo como especificidad clínica, especificidad analítica (reactividad cruzada), rango lineal o linealidad y exactitud, precisión intraensayo y comparación con un ensayo de referencia. Resultados: La especificidad analítica y clínica fue del 100 por ciento. Al evaluar la linealidad y exactitud con un estándar de referencia de la OMS, se obtuvo que la totalidad de las diferencias entre los Log10 del valor obtenido y el de referencia resultaron inferiores a 0,5 Log10 (r= 0,9977 y r2= 0,9954). Además, se obtuvieron bajos coeficientes de variación intraensayo. La evaluación comparativa con el estuche comercial Artus HBV RG PCR kit mostró una correlación fuerte (r= 0,8882). Conclusiones: SUMASIGNAL VHB (un paso) es un ensayo fácil de realizar manualmente, es rápido e incluye reactivos de extracción de ácidos nucleicos. Teniendo en cuenta la validez del método para el uso previsto, puede ser recomendado para su introducción en el diagnóstico, la vigilancia y la indicación de tratamiento en los pacientes con hepatitis B crónica(AU)

Introduction: Assays to quantify hepatitis B virus (HBV) DNA or viral load are indispensable for the diagnosis and follow-up of patients with chronic hepatitis B, hence the availability of diagnostic kits for this purpose. The present study deals with the validation of HBV SUMASIGNAL (one step), a real time polymerase chain reaction (RT-PCR) system for quantification of the HBV genome proposed by the Immunoassay Center. Objective: Evaluate the analytical performance of HBV SUMASIGNAL (one step). Methods: Use was made of a panel of 80 well characterized serum samples and the Third WHO International Standard for hepatitis B virus nucleic acid amplification techniques. Determination was performed of assay characteristics such as clinical specificity, analytical specificity (cross-reactivity), linear range or linearity and accuracy, intra-assay precision and comparison with a reference assay. Results: Analytical and clinical specificity was 100 percent. Evaluation of linearity and accuracy with a WHO reference standard revealed that all the differences between the log10 of the value obtained and the reference value were lower than 0.5 log10 (r= 0.9977 and r2= 0.9954). The intra-assay variation coefficients obtained were low. Comparative evaluation with the commercial Artus HBV RG PCR kit showed a strong correlation (r= 0.8882). Conclusions: The assay HBV SUMASIGNAL (one step) is easy to conduct manually, fast and includes reagents for nucleic acid extraction. Based on the validity of the method for the use in mind, it may be recommended for incorporation into the diagnosis, surveillance and treatment of patients with chronic hepatitis B(AU)

Prevalencia de marcadores del virus de la hepatitis B en donantes de sangre cubanos / Prevalence of Hepatitis B virus markers in Cuban blood donors

Introducción: La incidencia de la hepatitis B en Cuba se redujo notablemente desde la incorporación de la vacuna cubana Heberbiovac HB. Objetivo: Determinar la prevalencia de marcadores del virus de la hepatitis B en donantes de sangre de tres provincias y la persistencia de los anticuerpos contra el antígeno de superficie de este virus en donantes nacidos posterior a la introducción de la vacuna cubana en el Programa Nacional de Inmunización. Métodos: Se aplicó el diseño de un estudio de prevalencia. Se incluyeron 433 donantes que acudieron a los bancos de sangre de las provincias La Habana, Villa Clara y Santiago de Cuba, entre enero y diciembre de 2018. Se detectaron los marcadores HBsAg, anti-HBc y anti-HBs; este último en donantes con edades entre 18 a 26 años. Se realizó la proteína C reactiva (PCR) en tiempo real para identificar la replicación viral en individuos positivos al HBsAgo al anti-HBc. Resultados: La prevalencia de HBsAg y de anti-HBc fue de 1,15 por ciento (5/433) y 7,85 por ciento (38/433), respectivamente. En los individuos nacidos después de la introducción de la vacuna, la prevalencia de HBsAg y anti-HBc fue 0 por ciento y 0,95 por ciento, respectivamente. El 36,1 9 por ciento (38/105) de estos donantes tenían niveles protectores de anti-HBs (≥ 10 UI/L). El ADN viral se detectó en un donante positivo al HBsAg y anti-HBc; no se identificó infección oculta por el virus de la hepatitis B. Conclusiones: La prevalencia del HBsAg es baja en donantes de sangre cubanos, con tendencia a ser nula en donantes nacidos después de la aplicación de la vacuna cubana Heberbiovac HB(AU)

Introduction: The incidence of hepatitis B in Cuba has decreased significantly since incorporation of Cuban vaccine Heberbiovac HB. Objective: To determine the prevalence of hepatitis B virus markers in blood donors from three provinces and the persistence of antibodies against surface antigen of this virus in blood donors born after introduction of Cuban vaccine in the National Immunization Program. Methods: The design of a prevalence study was applied. We included 433 donors who attended the blood banks of the provinces of Havana, Villa Clara and Santiago de Cuba, between January and December 2018.The HBsAg, anti-HBc and anti-HBs markers were detected; the latter was detected in donors aged 18-26 years. The real-time analysis of C-reactive protein (CRP) was performed to identify viral replication in individuals positive to HBsAg-positive and to anti-HBc. Results: The prevalence of HBsAg and anti-HBc was 1.15 percen t (5/433) and 7.85 percent (38/433), respectively. In individuals born after introduction of the vaccine, the prevalence of HBsAg and anti-HBc was 0 percent and 0.95 percent, respectively. 36.19 percent (38/105) of these donors had protective levels of anti-HBs (≥10UI/L). Viral DNA was detected in a donor positive to HBsAg and to anti-HBc. Hidden infection with the hepatitis B virus was not identified. Conclusions: The prevalence of HBsAg is low among Cuban blood donors, with a tendency to be null in donors born after application of Cuban vaccine Heberbiovac HB(AU)

Hepatitis B virus infection assessed 3 to 18 years after vaccination in Cuban children and adolescents born to HBsAg-positive mothers.

Thirty-two participants, aged between 3-18 years, born to hepatitis B surface antigen (HBsAg)-positive mothers and vaccinated at birth were analyzed for hepatitis B virus (HBV) infection. Overall, 56% had anti-HB titers ≥10 IU/L; five were positive for antibodies to the core antigen (anti-HBc), and two of these were also positive for HBsAg/DNA. One of the HBsAg/anti-HBc double-negative children presented with an unusual occult infection (HBV DNA-positive). No known vaccine escape mutations were detectable. Our data suggest that the vaccine protected 93.8% of children in this high-risk group against chronic HBV infection. Occult infections should be considered even in countries with low endemicity and high vaccination coverage.

Infección oculta por el virus de la hepatitis B en pacientes hemodializados cubanos / Occult hepatitis B virus infection in hemodialysis patients

Introducción: la infección oculta por el virus de la hepatitis B se caracteriza por la presencia en suero o plasma del genoma viral y anticuerpos contra la proteína de la cápsida (anti-HBc) en ausencia del marcador de infección.Objetivos: detectar la IOB en los pacientes hemodializados e identificar la posible relación de la IOB con la infección por el virus de la hepatitis C y variables sociodemográficas y epidemiológicas.Métodos: se estudiaron 709 muestras de pacientes provenientes de 18 unidades de hemodiálisis de Cuba. Se determinaron marcadores de infección, exposición e inmunidad al virus de la hepatitis B. Las muestras con HBsAg negativo, anti-HBc positivo y niveles de anti-HBs < 50 UI/L se les analizó la detección de ADN del virus de la hepatitis B y marcadores de lvirus de la hepatitis C.Resultados: las prevalencias de la infección y la exposición al virus de la hepatitis B fueron de 6,9 por ciento y 28,6 por ciento, respectivamente. El 4,3 por ciento de las muestras tuvieron criterio de infección oculta por el virus de la hepatitis B ; esta se detectó en el 58,1 por ciento (18/31) de los casos, con cargas virales menores de 105 UI/mL. La prevalencia global de infección oculta por el virus de la hepatitis B fue de 2,5 por ciento (18/709). No se encontró asociación significativa entre las variables analizadas.Conclusiones: la infección oculta por el virus de la hepatitis B fue frecuente en pacientes hemodializados con bajos niveles de anti-HBs, principalmente en aquellos con concentraciones no protectoras. Este estudio ratifica la necesidad de mantener la estrategia de prevención contra las hepatitis virales de transmisión parenteral en las unidades de diálisis(AU)

Introduction: occult hepatitis B virus infection is characterized by the presence of the viral genome and antibodies to the capside protein in serum or plasma (anti-HBc) that test negative for the infection marker.Objectives: to detect the occult hepatitis B virus in hemodialysis patients and to identify the possible relationship between occult hepatitis B infection and hepatitis C virus infection and the epidemiological and demographic variables.Methods: seventy thousand and nine serum samples from patients treated in 18 hemodialysis units were included. Serological markers for HBV infection, exposure and immunity were tested. Samples with negative HBsAg , positive anti-HBc and anti-HBs titers <50 IU/L were tested for detection of HBV-DNA and HCV markers.Results: the prevalence of HBV infection and exposure were 6.9 percent and 28.6 percent respectively. In the group, 4.3 percent of samples met occult hepatitis B infection criteria, the HBV-DNA was detected in 58.1 percent (18/31) of the samples, with viral loads below 105 IU/mL. Overall occult hepatitis B infection prevalence was 2.5 percent (18/709). There was no significant association among the analyzed variables.Conclusions: occult hepatitis B infection was frequent in hemodialysis patients with low levels of anti-HBs mainly in those with non protected titers. This study supports the need of keeping the prevention strategies against parenterally transmitted viral hepatitis in dialysis units(AU)

Infección oculta por el virus de la hepatitis B en pacientes hemodializados cubanos / Occult hepatitis B virus infection in hemodialysis patients

Introducción: la infección oculta por el virus de la hepatitis B se caracteriza por la presencia en suero o plasma del genoma viral y anticuerpos contra la proteína de la cápsida (anti-HBc) en ausencia del marcador de infección.Objetivos: detectar la IOB en los pacientes hemodializados e identificar la posible relación de la IOB con la infección por el virus de la hepatitis C y variables sociodemográficas y epidemiológicas.Métodos: se estudiaron 709 muestras de pacientes provenientes de 18 unidades de hemodiálisis de Cuba. Se determinaron marcadores de infección, exposición e inmunidad al virus de la hepatitis B. Las muestras con HBsAg negativo, anti-HBc positivo y niveles de anti-HBs < 50 UI/L se les analizó la detección de ADN del virus de la hepatitis B y marcadores de lvirus de la hepatitis C.Resultados: las prevalencias de la infección y la exposición al virus de la hepatitis B fueron de 6,9 por ciento y 28,6 por ciento, respectivamente. El 4,3 por ciento de las muestras tuvieron criterio de infección oculta por el virus de la hepatitis B ; esta se detectó en el 58,1 por ciento (18/31) de los casos, con cargas virales menores de 105 UI/mL. La prevalencia global de infección oculta por el virus de la hepatitis B fue de 2,5 por ciento (18/709). No se encontró asociación significativa entre las variables analizadas.Conclusiones: la infección oculta por el virus de la hepatitis B fue frecuente en pacientes hemodializados con bajos niveles de anti-HBs, principalmente en aquellos con concentraciones no protectoras. Este estudio ratifica la necesidad de mantener la estrategia de prevención contra las hepatitis virales de transmisión parenteral en las unidades de diálisis(AU)

Introduction: occult hepatitis B virus infection is characterized by the presence of the viral genome and antibodies to the capside protein in serum or plasma (anti-HBc) that test negative for the infection marker.Objectives: to detect the occult hepatitis B virus in hemodialysis patients and to identify the possible relationship between occult hepatitis B infection and hepatitis C virus infection and the epidemiological and demographic variables.Methods: seventy thousand and nine serum samples from patients treated in 18 hemodialysis units were included. Serological markers for HBV infection, exposure and immunity were tested. Samples with negative HBsAg , positive anti-HBc and anti-HBs titers <50 IU/L were tested for detection of HBV-DNA and HCV markers.Results: the prevalence of HBV infection and exposure were 6.9 percent and 28.6 percent respectively. In the group, 4.3 percent of samples met occult hepatitis B infection criteria, the HBV-DNA was detected in 58.1 percent (18/31) of the samples, with viral loads below 105 IU/mL. Overall occult hepatitis B infection prevalence was 2.5 percent (18/709). There was no significant association among the analyzed variables.Conclusions: occult hepatitis B infection was frequent in hemodialysis patients with low levels of anti-HBs mainly in those with non protected titers. This study supports the need of keeping the prevention strategies against parenterally transmitted viral hepatitis in dialysis units(AU)

Detección del genotipo 1d del virus de la hepatitis E en pacientes con sospecha de hepatitis viral aguda, Cuba 2013 / Detection of hepatitis E virus genotype 1d in patients with suspect of acute viral hepatitis in Cuba during 2013

Resumen Introducción El virus de la hepatitis E (VHE) se transmite, principalmente, por vía fecal-oral y es una de las principales causas de hepatitis viral aguda (HVA) en el mundo. En Cuba, a pesar de que este virus tiene un comportamiento endémico, no se relaciona a este patógeno al presentarse una hepatitis viral de trasmisión entérica. Objetivo Teniendo en cuenta que el VHE y el virus de la hepatitis A (VHA) comparten rutas de transmisión, nos propusimos estimar la incidencia de ésta infección (VHE), en muestras que se recibieron de todo el país durante el año 2013, cuyo criterio de inclusión fue la indicación médica de IgM anti-VHA. Materiales y Métodos Se empleó la RT-PCR específica para el marco abierto de lectura 2 (MAL2), con el propósito de detectar el ARN-VHE en las 422 muestras estudiadas. Los productos amplificados fueron purificados, secuenciados y analizados filogenéticamente con el programa MEGA6. Resultados La presencia de ARN-VHE se detectó en 8,53% (36/422) de las muestras estudiadas. El mayor índice de positividad se identificó en la región occidental del país, específicamente en La Habana con 5,45% (23/422). En total se diagnosticaron 5,21% (22/422) muestras positivas al marcador de IgM VHA; la detección simultánea de marcadores del VHA-VHE fue 13,88% (5/36). Los resultados demuestran una mayor incidencia del VHE con respecto al VHA (8,53% vs 5,21%) y el análisis filogenético mostró la circulación del genotipo 1, subgenotipo 1d del VHE. Conclusiones Se corroboró la endemicidad del VHE en nuestro país y, por primera vez, se identificó el subgenotipo 1d, variante africana asociada a casos esporádicos y brotes de hepatitis E.

Abstract Introduction Hepatitis E virus (HEV) is mainly transmitted by the fecal-oral route and is one of the most important causes of acute viral hepatitis (AVH) around the world. In Cuba, Despite of endemic behavior of HEV in Cuba, its causality is not associated when a picture of enteric acute hepatitis is suspected. Objective Taking into account the common transmission route of both HEV and HAV, our aim was to estimate the incidence of HEV infection in sera samples received throughout the country during 2013 where the IgM anti-HAV test was required by the Clinician. Materials and Methods A specific RT-PCR for open reading frame 2 (ORF2) was used to detect RNA-HEV in 422 sera. The amplified products corresponding to ORF2 were purified, sequenced and phylogenetically analyzed using MEGA6 software program. Results RNA-HEV was detected in 8.53% (36/422) of the samples. The highest rate of positivity was identified in the Western region of the country, specifically in Havana 5.45% (23/422). IgM anti-HAV was detected in 5.21% (22/422) and simultaneous detection of both HAV and HEV was found in 13.88% (5/36) of the samples. The results showed a higher incidence of HEV with respect to HAV (8.53% vs 5.21%) and phylogenetic analysis showed the circulation of genotype 1, subgenotype 1d of the HEV. Conclusions This study corroborated the endemicity of HEV and for the first time the subgenotype 1d, the African variant strain associated to outbreak of hepatitis E, is reported in viral hepatitis cases in Cuba.

Infección oculta por el virus de la hepatitis B en hijos de madres positivas al HBsAg / Occult hepatitis B virus infection in children born of HBsAg-positive mothers

La infección oculta por el virus de la hepatitis B (IOB), se caracteriza por la presencia en suero o plasma del genoma viral (ADN-VHB) y anticuerpos contra la proteína de la cúpside (anti-HBc) en ausencia del antígeno de superficie (HBsAg), marcador que tradicionalmente se emplea para identificar la presencia del virus. Con el objetivo de caracterizar la presencia de IOB en hijos de madres positivas al HBsAg, se estudiaron 291 muestras séricas de niños con la condición de ser HBsAg (-) y anticuerpos anti-HBsAg (anti-HBs) menores de 50 UI/L, conservadas en la seroteca del Laboratorio de Referencia Nacional de Hepatitis Virales. Se realizaron ensayos para determinar la exposición al virus (anti-HBc), a los sueros anti-HBc (+) se les realizó Reacción en Cadena de la Polimerasa en Tiempo Real (RCP-TR) para determinar y cuantificar el ADN-VHB. La prevalencia de exposición al VHB (anti-HBc) fue 16,8 por ciento (49/291). El ADN viral se cuantificó en el 14 por ciento (6/43) de los casos anti-HBc (+), observándose cargas virales que oscilaban entre 2,15 x 101 hasta 3,42 x 101 UI/mL. La prevalencia de la IOB para el total de los pacientes analizados fue 2,1 por ciento (6/291), considerada relativamente baja. No se encontró asociación significativa entre las variables sociodemográficas analizadas tales como: edad, sexo y provincia de procedencia. La IOB está presente en hijos de madres positivas al HBsAg, a pesar de la profilaxis contra la hepatitis B. Por lo tanto, se requiere de pesquisajes adecuados para detectar dicha entidad. Las implicaciones clínicas y epidemiológicas de la misma, requieren de un estrecho monitoreo y atención de estos pacientes. Este estudio se realiza por primera vez en Cuba y aporta conocimientos útiles para el diagnóstico, prevención y control de esta enfermedad en niños(AU)

The occult hepatitis B infection (OBI) is defined as the presence of hepatitis B virus (HBV) DNA and antibodies to core antigens of the HBV (anti-HBc) in the sera or in the plasma and the absence of hepatitis B surface antigen (HBsAg). The current study aimed to characterize the OBI in children born of HBsAg-positive mothers. Serum samples of 291 children with negative HBsAg and anti-HBs <50UI/L collected from all over the country with active-pasive immunization, were screened for anti-HBc antibodies. Those anti-HBc positive sera were subsequently tested by Real-Time Polymerase Chain Reaction to determine and quantify HBV-DNA levels and its correlation with socio-demographics data. The prevalence of anti-HBc positivity was 16.8 percent (49/291). HBV-DNA was detected in 14 percent of the examined cases with a low HBV viral load ranging from 2.15 to 3.42 x 101 UI/mL. The overall OBI prevalence rate was 2.1 percent (6/291). There were no statistically significant differences between the sociodemographic variables studied (age, sex and location). OBI is present among Cuban children born of HBsAg-positive mothers despite prophylaxis against hepatitis B. Therefore, sensitive screening assays for occult HBV infection must be considered and deserves an adequate clinical monitoring of these patients. This study is carried out for the first time in Cuba and makes a useful contribution to prevention and control of hepatitis B in children(AU)

Hepatitis E virus genotype 3 in humans and swine, Cuba.

This study was conduced to determinate the seroprevalence and risk factors associated to hepatitis E virus (HEV) exposition, in individuals who work in pig farms located at western of Artemise Province. The presence of HEV in human and swine samples and the phylogenetic analysis were evaluated. One hundred six workers (with an age range of 18-70years) were enrolled in this study. Two groups were defined, 69 employees with swine related occupations and 37 workers without contact with pigs. None had abroad travel history. Serum samples were tested for immunoglobulins (Ig) M, G and A against HEV. Individual fecal samples were obtained from 57 workers and 53 swine. All feces were tested for HEV RNA using reverse transcription PCR (RT-PCR). The amplification products were sequenced and phylogenetically analyzed by using MEGA5 software. A total of 38 (35.8%) (95% CI: 26.2-45.4) sera was positive for antibodies against HEV (anti-HEV). These were higher in persons who work in contact with swine compare as individuals with occupations without pig contact (40.5%, 28/69, 95% CI: 28.2-52.8, versus 27.0%, 10/37, 95% CI: 11.3-42.6, respectively). The prevalence of anti-HEV was higher in workers with an age range of 60-70years old and time-work 10-13years. HEV RNA was detected in 8 (14.0%) of 57 human fecal samples and 10 (18.8%) of 53 swine fecal samples. Phylogenetic analysis was performed on 7 amplification products obtained from 3 human and 4 swine fecal samples. Human and swine HEV sequences were closely related (94-99% nucleotide homology) and belonged to HEV genotype 3, subtype 3a.

HCV genotype determination in monoinfected and HIV co-infected patients in Cuba.

With the aim to characterize the HCV genotype distribution in Cuba, sera were collected from two subgroups: HCV-monoinfected and HCV/HIV co-infected patients. A combination of reverse transcription-PCR using genotype-specific primers, restriction fragment length polymorphism and sequencing was used to determine the genotype of 84 samples. Seventy-nine (94%) showed single infections (10 [12%] were genotype 1a and 69 [82%] genotype 1b) and 5 (6%) samples corresponded to mixed infections (2 [2%] with genotypes 1a/3a and 1 sample [1%] each with 1b/3a, 1b/4a and 1a/1b/3a). HCV/HIV co-infected subjects had a higher frequency of mixed infections (p=0.08), infection with genotype 3a (p=0.18) and for the first time genotype 4a was found. There was no association of any demographic characteristics with any specific genotype although HCV/HIV co-infected patients showed a tendency to have mixed genotypes in those older than 45 years of age (p=0.11). Phylogenetic analysis showed that HCV isolates clustered with subtypes 1b (n=15, maximal genetic distance 2.51%) and 1a (n=2, maximal genetic distance 0.35%). This report presents the prevalence of HCV genotypes in monoinfected and HIV co-infected patients, mixed HCV infections in HCV/HIV co-infected men who have sex with men with high-risk sexual practices and for the first time identifies that the uncommon genotype 4a can be present in a patient co-infected with HIV.

Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B / Real-time polymerase chain reaction assay for Hepatitis B virus DNA quantification

Introducción: los niveles de ADN viral en muestras de suero son un marcador útil para monitorear la progresión de la enfermedad y la respuesta al tratamiento en pacientes con hepatitis B crónica; de ahí que se comercialicen estuches diagnósticos para esta función, con la desventaja de ser costosos. Objetivos: desarrollar y evaluar el desempeño analítico de un sistema de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B. Métodos: se utilizaron cebadores que amplifican un fragmento del gen C y sonda de hidrólisis en el equipo LightCycler 1.5. Se construyó una curva estándar y se evaluó su eficiencia. Se utilizaron 272 muestras de suero para ensayos de especificidad analítica y clínica, especificidad y exactitud genotípica, coeficientes de variación intraensayo e interensayo, comparación con un estuche comercial y con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa para el virus de la hepatitis B. Resultados: la curva estándar mostró excelente correlación lineal (r= -1) y valores muy bajos de error a lo largo de varias magnitudes de concentración de ADN diana. La especificidad analítica y clínica fue de 100 %, en tanto que al evaluar la especificidad y exactitud genotípica, se obtuvo que las diferencias entre los Log10 del valor obtenido y el de referencia eran inferiores a 0,5 Log10. El límite de detección por análisis de Probit se estimó en 16,41 UI/µL con un rango dinámico de cuantificación de hasta 10(8) UI/mL. El sistema mostró bajos coeficientes de variación intraensayo (0,16 a 1,45 %) e interensayo (0,9 a 2,62 %). La comparación con el estuche comercial artus HBV LC PCR kit mostró una correlación de r= 0,964 y r²= 0,929; con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa se confirmó la mayor sensibilidad y ventajas de la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Conclusiones: el ensayo cumple con los requisitos para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B, que demuestra ser específico, sensible y reproducible. Su aplicación permitirá un mejor diagnóstico y seguimiento de los pacientes con hepatitis B crónica en Cuba.

Introduction: viral DNA levels in serum samples are a useful marker to monitor the disease progression and the treatment response in patients with chronic hepatitis B. Commercial kits for this purpose are available, but they are considerably expensive. Objectives: to evaluate the analytical performance of a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for Hepatitis B virus DNA quantification. Methods: specific primers to the gene C and TaqMan chemistry in a LightCycler 1.5 equipment was used. A standard curve was made and evaluated. Two hundred and seventy-two serum samples were used to assess the clinical and analytical specificity, the genotypic accuracy and specificity, the intra-assay and interassay coefficients of variation and the comparison with a commercial assay and with the qualitative PCR. Results: the standard curve showed a strong linear correlation (r= -1) and low error values in the tested target DNA concentration. Analytical and clinical specificities were 100 %. Genotype accuracy and specificity showed that the differences between the results obtained by RT-PCR assay and those of the reference assay were less than 0.5 Log10. The 95% HBV DNA detection end-point assessed by Probit analysis was 16.41 IU/µL with a dynamic range of quantification of 10(8) IU/mL. Intra-assay and interassay coefficients of variation ranged from 0.16 to 1.45 % and 0.9 to 2.62 % respectively. The RT-PCR assay correlated well with those from a commercial assay (r= 0.964 and r²= 0.929) and with the HBV qualitative PCR, thus confirming its better sensitivity and advantages. Conclusions: the RT-PCR assay is well suited to monitoring HBV DNA levels showing to be sensitive, specific and reproducible. Its application in the clinical practice ensures a better diagnosis and management of patients with chronic hepatitis B in Cuba.

Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B / Real-time polymerase chain reaction assay for Hepatitis B virus DNA quantification

Introducción: los niveles de ADN viral en muestras de suero son un marcador útil para monitorear la progresión de la enfermedad y la respuesta al tratamiento en pacientes con hepatitis B crónica; de ahí que se comercialicen estuches diagnósticos para esta función, con la desventaja de ser costosos. Objetivos: desarrollar y evaluar el desempeño analítico de un sistema de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B. Métodos: se utilizaron cebadores que amplifican un fragmento del gen C y sonda de hidrólisis en el equipo LightCycler 1.5. Se construyó una curva estándar y se evaluó su eficiencia. Se utilizaron 272 muestras de suero para ensayos de especificidad analítica y clínica, especificidad y exactitud genotípica, coeficientes de variación intraensayo e interensayo, comparación con un estuche comercial y con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa para el virus de la hepatitis B. Resultados: la curva estándar mostró excelente correlación lineal (r= -1) y valores muy bajos de error a lo largo de varias magnitudes de concentración de ADN diana. La especificidad analítica y clínica fue de 100 %, en tanto que al evaluar la especificidad y exactitud genotípica, se obtuvo que las diferencias entre los Log10 del valor obtenido y el de referencia eran inferiores a 0,5 Log10. El límite de detección por análisis de Probit se estimó en 16,41 UI/µL con un rango dinámico de cuantificación de hasta 10(8) UI/mL. El sistema mostró bajos coeficientes de variación intraensayo (0,16 a 1,45 %) e interensayo (0,9 a 2,62 %). La comparación con el estuche comercial artus HBV LC PCR kit mostró una correlación de r= 0,964 y r²= 0,929; con la reacción en cadena de la polimerasa cualitativa se confirmó la mayor sensibilidad y (AU)

Introduction: viral DNA levels in serum samples are a useful marker to monitor the disease progression and the treatment response in patients with chronic hepatitis B. Commercial kits for this purpose are available, but they are considerably expensive. Objectives: to evaluate the analytical performance of a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for Hepatitis B virus DNA quantification. Methods: specific primers to the gene C and TaqMan chemistry in a LightCycler 1.5 equipment was used. A standard curve was made and evaluated. Two hundred and seventy-two serum samples were used to assess the clinical and analytical specificity, the genotypic accuracy and specificity, the intra-assay and interassay coefficients of variation and the comparison with a commercial assay and with the qualitative PCR. Results: the standard curve showed a strong linear correlation (r= -1) and low error values in the tested target DNA concentration. Analytical and clinical specificities were 100 %. Genotype accuracy and specificity showed that the differences between the results obtained by RT-PCR assay and those of the reference assay were less than 0.5 Log10. The 95% HBV DNA detection end-point assessed by Probit analysis was 16.41 IU/µL with a dynamic range of quantification of 10(8) IU/mL. Intra-assay and interassay coefficients of variation ranged from 0.16 to 1.45 % and 0.9 to 2.62 % respectively. The RT-PCR assay correlated well with those from a commercial assay (r= 0.964 and r²= 0.929) and with the HBV qualitative PCR, thus confirming its better sensitivity and advantages. Conclusions: the RT-PCR assay is well suited to monitoring HBV DNA levels showing to be sensitive, specific and reproducible. Its application in the clinical practice ensures a better diagnosis and management of patients with chronic hepatitis B in Cuba.(AU)

[Real-time polymerase chain reaction assay for hepatitis B virus DNA quantification]. / Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real para la cuantificación del ADN del virus de la hepatitis B.

INTRODUCTION: viral DNA levels in serum samples are a useful marker to monitor the disease progression and the treatment response in patients with chronic hepatitis B. Commercial kits for this purpose are available, but they are considerably expensive. OBJECTIVES: to evaluate the analytical performance of a real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) assay for Hepatitis B virus DNA quantification. METHODS: specific primers to the gene C and TaqMan chemistry in a LightCycler 1.5 equipment was used. A standard curve was made and evaluated. Two hundred and seventy-two serum samples were used to assess the clinical and analytical specificity, the genotypic accuracy and specificity, the intra-assay and interassay coefficients of variation and the comparison with a commercial assay and with the qualitative PCR. RESULTS: the standard curve showed a strong linear correlation (r= -1) and low error values in the tested target DNA concentration. Analytical and clinical specificities were 100 %. Genotype accuracy and specificity showed that the differences between the results obtained by RT-PCR assay and those of the reference assay were less than 0.5 Log10. The 95% HBV DNA detection end-point assessed by Probit analysis was 16.41 IU/microL with a dynamic range of quantification of 10(8) IU/mL. Intra-assay and interassay coefficients of variation ranged from 0.16 to 1.45 % and 0.9 to 2.62 % respectively. The RT-PCR assay correlated well with those from a commercial assay (r= 0.964 and r2= 0.929) and with the HBV qualitative PCR, thus confirming its better sensitivity and advantages. CONCLUSIONS: the RT-PCR assay is well suited to monitoring HBV DNA levels showing to be sensitive, specific and reproducible. Its application in the clinical practice ensures a better diagnosis and management of patients with chronic hepatitis B in Cuba.

Aislamiento y propagación del virus de la hepatitis E en diferentes líneas celulares / Isolation and propagation of hepatitis E virus in several cell lines

Antecedentes: el virus de la hepatitis E es el agente causal de la hepatitis E. Las propiedades biológicas y moleculares de las cepas asiáticas del VHE ya han sido exploradas en cultivos celulares. Objetivos: aislar y propagar una cepa cubana del virus de la hepatitis E en diferentes líneas celulares. Métodos: la monocapa de las células A549 fue inoculada con una suspensión de heces obtenida de un paciente con diagnóstico serológico y molecular de hepatitis E. Estas células fueron observadas hasta el décimo pase. Mientras que, las líneas celulares MRC5, LLCMK2, HEP-2, FRhK4 y HeLa fueron utilizadas para propagar el virus de la hepatitis E, a partir del sobrenadante obtenido del tercer pase en A549. Estas células fueron seguidas hasta el tercer pase. El ARN y los antígenos de la cepa ECV/2349-03 fueron identificados por TR-RCP e inmunofluorescencia indirecta. Resultados: en las células A549 el ECP apareció desde el primer pase, a los 3 d de posinoculación. El genoma y los antígenos del virus fueron identificados en todos los pases seriados. En el resto de las líneas celulares estudiadas no se observó el ECP. En estas células el material genético del virus de la hepatitis E se detectó desde el primer pase y los antígenos a partir del segundo pase, excepto en las HeLa. Conclusiones: estos resultados confirman que las células A549 pueden ser utilizadas para aislar y propagar el virus de la hepatitis E, mientras que las células MRC5, LLCMK2, HEP-2 y FRhK4 son capaces de mantener el crecimiento viral.

Background: hepatitis E virus (HEV) is the causative agent of hepatitis E. Biological and molecular properties of Asian HEV strains have been explored in cells cultures. Objetives: the aim of this investigation was to isolate and propagate a Cuban HEV isolate in different cell lines. Methods: A549 cells monolayer was infected with faeces suspension from patient with sporadic hepatitis E and followed up until tenth passage. Lately, the supernatant harvested from third passage in A549 cells was inoculated in MRC5, HEP-2, LLCMK2, HeLa y FRhK4 for propagation study. These cells were observed up to third passage. RNA and viral antigen of ECV/2349-03 HEV strain were identified by RT-PCR and indirect immunofluorescence. Results: CPE appeared since first passage, at third day of post-inoculation in A549 cells. HEV antigens and genome were detected in all serial passages. CPE was not observed in the rest of cellular cultures. In the cells used for propagation the viral genome was observed from first passage, while the antigens were detected since second passage, except HeLa. Conclusions: these results confirm that A549 can be used to isolate and propagate HEV. Meanwhile, the MRC5, HEP-2, LLCMK2 and FRhK4 were able to support viral growing.